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机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸(PUFA)，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物。如：醛基(丙二醛MDA)、酮基、羟基、羰基、氢过氧基或内过氧基，以及新的氧自由基等。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂，即非自由基性的脂类分解产物，而且通过链式或链式支链反应，放大活性氧的作用。因此，初始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成，这些分解产物中，一些是无害的，另一些则能引起细胞代谢及功能障碍，甚至死亡。氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸(PUFA)的过氧化引起细胞损伤，而且还能通过脂氢过氧化物的分解产物引起细胞损伤。因而测试MDA的量常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程度。

MDA的测定常常与SOD的测定相互配合，SOD活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力，而MDA的高低又间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度，通过SOD与MDA的结果分析有助于医学、生物学、药理及工农业生产的发展。

1. 本试剂盒中试剂均无刺激性气味，对操作人员无任何毒害。
   
2. 快速准确，操作简便，每小时可测100例以上样本。
   
3. 灵敏度高，血清或血浆样品只需0.1mL，或者更少。
   
4. 再现性好，变异系数CV=2.0%，同一份标本数次测试结果相差极微。
   
5. 呈色稳定，呈色后半天内测吸光度不变。
   
6. 试剂稳定，保存期一年。试剂三配置后避光室温保存至少三个月(颜色变为咖啡色即不可使用)。
   
7. 血清样品放置4℃，3～5天内测试结果不变。-70℃以下可保存3个月至半年。
   
8. 测试面广，可测血清(浆)、各种组织匀浆，培养细胞等。
   
9. 主要原料均为进口，但价格适中。
   
10. 不需昂贵与特殊仪器，只需恒温水浴箱或铝锅、铝盆开盖煮沸，及721、722、751、752分光光度计任一型号均可。
    
11. 不受气温等外界因素的影响，是目前国内最稳定的MDA测试方法。

1. Buffer B用时每瓶加170mL(50T)或340mL(100T)双蒸水混匀，4℃冷藏。
   
2. 试剂C(显色剂)：用时将粉剂加入到90～100℃的热双蒸水30mL(50T)或60mL(100T)中，(在溶解过程中可适当加热)，充分溶解后用双蒸水补足至30mL(50T)或60mL(100T)，再加冰醋酸30mL(50T)或60mL(100T)，混匀，配好的试剂避光冷藏。
   注：冰醋酸自备，又名乙酸，一般的医药公司、化剂公司均有售，要购AR级即分析纯级的乙酸的较好，乙酸含量为99%以上。
   
3. 标准品：10nmol/mL四乙氧基丙烷，4℃冷藏。

1. 试管要刷洗干净，尤其测微量样品时更为重要。
   
2. 配制试剂时要充分混匀。测试过程中第一管吸的试剂要丢弃，加样品或试剂时要垂直加，不要加在管壁上。95℃水浴前要充分混匀。
   
3. 水浴时间及温度要固定。没有水浴锅的单位可用铝锅、铝盒、铝盆等开盖煮沸即可。
   
4. 高脂样本操作时，离心沉淀一定要充分，否则影响吸光度，造成结果不稳定。这种情况可增加离心转速(3000转/分以上)或者延长离心时间使沉淀完全。
   
5. 冬天若发现测试溶液呈雾状可以轻轻放入水浴箱稍稍加温，待溶液溶解呈透明状态用移液器吸取放入比色杯中，若仍然呈雾状，则考虑为高脂血症。
   
6. 样本取样量：若您的样量较多，取样量可以加倍，抽提过程中，双蒸水、无水乙醇、氯仿均要加倍。若您的样本为贫血病人的血样，则取样量也要加倍，抽提过程中，双蒸水、无水乙醇、氯仿的量不变。
   
7. 95℃水浴时最好用带盖的试管，以免反应液的蒸发。若没有带盖的试管可用冰箱保鲜膜盖好，用橡皮筋扎好后在保鲜膜上用针刺一小孔即可代替盖子。

1. 按下表加入各成分：
   

   成分	标准管	标准空白管	测定管	测定空白管
   10nmol/mL标准品(ml)	a
   无水乙醇(ml)		a
   测试样品(ml)			a	a
   Buffer A(ml)	a	a	a	a
   混匀(摇动几下试管架)
   Buffer B(ml)	3	3	3	3
   试剂C(ml)	1	1	1
   50%冰醋酸(ml)				1
   漩涡混合器混匀，试管口用保鲜薄膜扎紧，用针头刺一小孔，95℃水浴(或用锅开盖煮沸)40分钟，取出后流水冷却，532nm处，1cm光径，蒸馏水调零，测各管吸光度值。

   注：
   ① a表示所取的样品量、标准品量、无水乙醇的量、无水乙醇的量、buffer A的量，四者均相等。例如样品取0.1mL则标准品、无水乙醇及buffer A也取0.1mL，若样品取0.2mL则标准品、无水乙醇及buffer A也取0.2mL。因吸光度与加样量呈正比曲线，因而结果不受影响。
   ② 测定空白管每个样本都需要做。
   
2. 参考取样量：血清(浆)取0.1～0.2mL。低浓度脂蛋白悬液0.1～0.2mL。细胞悬液及细胞上清取0.1～0.2mL。
   
3. 规范操作方法标准管参考吸光度：当标准品取样量为0.1mL时，则标准管吸光度减去标准空白管的吸光度0.065～0.070.当标准品取样量为0.2mL时，则标准管吸光度减去标准空白管的吸光度为0.130～0.140。
   
4. 规范操作方法及简便操作方法中，若发现检测样本吸光度太低，若发现检测样本吸光度太低，可以将水浴时间，可以将水浴时间40分钟延长至80分钟，但您的同一课题中MDA的检测都必须延长至80分钟，以免造成批间，以免造成批间差异。
   
5. 计算公式：
   
   1. 血清(浆)中MDA含量计算公式：
      

      血清(浆)中MDA含量 (nmol/mL)	＝	测定管吸光度－测定空白管吸光度	×	标准品浓度 (10nmol/mL)
      		标准管吸光度－标准空白管吸光度

   2. 组织及细胞中MDA含量计算公式：
      

      MDA含量 (nmol/mgprot)	＝	测定管吸光度－测定空白管吸光度	×	标准品浓度 (10nmol/mL)	÷	蛋白含量 (mgprot/mL)
      		标准管吸光度－标准空白管吸光度

6. 计算举例：
   
   1. 取未稀释血清0.1mL，检测MDA含量，测定管吸光度0.037，测定空白管吸光度0.019，标准管吸光度0.078，标准空白管吸光度0.007，则计算如下：
      

      血清(浆)中MDA含量 (nmol/mL)	＝	测定管吸光度－测定空白管吸光度			×	标准品浓度 (10nmol/mL)
      		标准管吸光度－标准空白管吸光度
      	＝	0.037－0.019	×10nmol/mL
      		0.078－0.007
      	＝	2.535nmol/mL

   2. 取细胞培养上清0.2mL，检测MDA含量，测定管吸光度0.032，测定空白管吸光度0.012，标准管吸光度0.154，标准空白管吸光度0.004，则计算如下：
      

      细胞上清中MDA含量 (nmol/mL)	＝	测定管吸光度－测定空白管吸光度			×	标准品浓度 (10nmol/mL)
      		标准管吸光度－标准空白管吸光度
      	＝	0.032－0.012	×10nmol/mL
      		0.154－0.004
      	＝	1.33nmol/mL

   3. 取10%腓肠肌匀浆上清0.1mL，检测MDA含量，测试管吸光度0.124，测定空白管吸光度0.006，标准管吸光度0.078，标准空白管吸光度0.006。10%腓肠肌匀浆上清蛋白含量为6.36mgprot／mL。计算如下：
      

      细胞匀浆中MDA含量 (nmol/mgprot)	＝	测定管吸光度－测定空白管吸光度			×	标准品浓度 (10nmol/mL)	÷	待测样本蛋白含量 (mgprot/mL)
      		标准管吸光度－标准空白管吸光度
      	＝	0.124－0.006	×10÷6.36
      		0.078－0.006
      	＝	2.577nmol/mgprot